免疫濁度分析方法

來(lái)源：http://www.thesierramadre.com/ 作者：余氯檢測儀 時(shí)間：2018-12-24

　　【關(guān)鍵詞】 免疫濁度分析;鉤狀效應

　　在免疫濁度分析中，抗原、抗體形成的沉淀量起初隨著(zhù)樣本濃度的增加而增加，但當樣本濃度過(guò)高時(shí)，沉淀量隨著(zhù)樣本濃度的增加反而減少，使反映信號弱化，信號-劑量(濃度)曲線(xiàn)呈鉤狀現象，而儀器是據沉淀量蟬翼的濁度計算結果的，因此當樣本濃度過(guò)高，測出的結果必然不準確。為此，我們以ApoA1為例，通過(guò)對儀器試劑測量范圍極限值上限和儀器自動(dòng)稀釋重做功能進(jìn)行設置，探討免疫濁度分析中鉤狀效應的防范。

　　1 材料與方法

　　1.1 材料 選取我院2004年4～12月門(mén)診及住院樣本中ApoA1超過(guò)測量范圍上限的樣本12例。儀器及試劑采用OLYMPUS AU400生化分析儀和浙江伊利康生物技術(shù)有限公司試劑(批號：04112)。校準液及質(zhì)控品采用浙江伊利康生物技術(shù)有限公司校準液(批號：04112)和北京中生北控物公司質(zhì)控產(chǎn)品(批號：022321)。

　　1.2 方法

　　1.2.1 儀器校準 每周用伊利康校準液對OLYMPUS AU400生化分析儀校正1次。

　　1.2.2 質(zhì)量控制 中生公司控品在OLYMPUS AU400上每日進(jìn)行室內質(zhì)控，用平時(shí)建立的質(zhì)控圖對質(zhì)控結果進(jìn)行監測，當質(zhì)控結果符合要求后方可開(kāi)始本樣本測定。

　　1.2.3 實(shí)驗方法 首先對儀器的試劑測量范圍上限和儀器自動(dòng)稀釋重做功能進(jìn)行設置，然后對設置前超過(guò)測量范圍上限的樣本進(jìn)行設置前后測定值比較并進(jìn)行配對資料的符號秩和檢驗。

　　1.2.4 儀器設置 ApoA1試劑測量范圍極限值(Dynanic)上限設為2.20，自動(dòng)重復(Auto repeat)和重復數據覆蓋(Repeat Data Overwrite)都選擇Yes，稀釋或模式(Diluted OR Mode)中選中F，特殊重復(Repeat special)中實(shí)驗項目(Test Name)選擇為ApoA1,稀釋(Diluted)樣本體積(Sample Volume)仍設為2，系統(System)下試驗申請(Test Requisition)中常規(Routine)設為架子編號方式(Rack NO.)，自動(dòng)/標準重復(Auto/Standard Repeat)設為Auto。

　　1.3 統計學(xué)處理 數據比較采用秩和檢驗和t檢驗。

　　2 結果

　　對儀器試劑測量范圍極限值上限和儀器自動(dòng)稀釋重做。

　　對樣本儀器設置前后測定值進(jìn)行配對資料的符號秩和檢驗，其差異有統計學(xué)意義(P<0.05=，儀器設置后測定組與設置前且人工對倍稀釋測定組測定值進(jìn)行配對資料t檢驗，其差異無(wú)統計學(xué)意義(P>0.05)。

　　3 討論

　　試劑的檢測范圍是0.50～2.20 g/L，當樣本濃度超過(guò)2.20 g/L時(shí)檢測出現鉤狀效應，則應將樣本人工或儀器自動(dòng)做1∶1稀釋后測定，因此將測量范圍極限值上限設為2.20 g/L，本研究主要探討儀器自動(dòng)稀釋功能。當測定樣本濃度大于4.40 g/L時(shí)，即使通過(guò)儀器自動(dòng)稀釋(因設置對倍稀釋)后的測定樣本濃度讓大于測量范圍極值上限2.20 g/L的檢測同樣存在鉤狀效應，因此，當樣本濃度高于4.40 g/L，通過(guò)儀器自動(dòng)稀釋功能測定的樣本結果與樣本真值之間仍存在較大的差異，此時(shí)必須加大樣本的稀釋倍數。

　　通過(guò)對儀器設置前超過(guò)測量范圍上限的樣本進(jìn)行設置前后測定值比較可知，ApoA1低于4.40 g/L的樣本在儀器設置前后測定值差異有統計學(xué)意義(P<0.05);通過(guò)對儀器設置后測定組與設置前且人工對倍稀釋測定組測定值無(wú)統計學(xué)意義(P>0.05)及免疫濁度分析原理可知，設置后測定組比設置前測定組樣本測定值更接近樣本真值。

　　通過(guò)儀器的設置，濃度低于4.40 g/L的ApoA1樣本，儀器均可以自動(dòng)測定，不需要每個(gè)樣本專(zhuān)門(mén)添加復原來(lái)檢測是否存在鉤狀現象，不用在儀器不報警的情況下人工檢查結果或結果標記，不用人工稀釋樣本，操作簡(jiǎn)便、準確。

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